※工艺技术 良品科学 ２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．２０ ７９ 响应面试验优化香根草油的超临界ＣＯ２萃取 工艺及其萃取物分析 廖耀华 ，王丹 ，王宝庆 ，刘振锋 ，任保增 一，王宏力 ４５０００１；２．河南省化工研究所有限责任公司，河南郑州４５００５２） （１．郑州大学化工与能源学院，河南郑州摘要：以新鲜香根草根须为原料，通过单因素试验研究粒径、装料系数、萃取压力、萃取温度、ＣＯ，流率及萃取 时间对超临界ＣＯ 萃提香根草油得率的影响。在此基础上，选取萃取压力、萃取温度和ＣＯ ｔ率为影响因素，以香 根草油得率为响应值，采用Ｂｏｘ．Ｂｅｈｎｋｅｎ方法设计试验，进行响应面分析。结果表明：超临界ＣＯ，萃取香根草油的 适宜工艺参数为粒径范围６０￣８０目、装料系数０．８、萃取压力２２．６１ ＭＰａ、萃取温度３５．４１℃、ＣＯ，流率１．６５ Ｌ／ｍｉｎ、 萃取时间１．５ ｈ。在此条件下预测香根草油得率达到７．７８０％，实验验证值为７．７６２％，与预测一致。采用气相色谱一质 谱法对超临界萃取的香根草油进行了成分分析，鉴定出１８种化合物，占总萃取物的６９．８８％。其中主要成分为柏木 烯醇、脱氢香橙烯、月桂烯酮以及香根草特有的香根醇、香根酮等化合物，并按照应用领域对其进行了分类总结。 关键词：超临界ＣＯ，萃取；香根草油；响应面法；气相色谱一质谱法 Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ＣＯ２ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｖｅｔｉｖｅｒ Ｅｓｓｅｎｔｉｌ ａＯｉｌ ＬＩＡＯ Ｙａｏｈｕａ ，ＷＡＮＧ Ｄａｎ ，ＷＡＮＧ Ｂａｏｑｉｎｇ ，ＬＩＵ Ｚｈｅｎｆｅｎｇ ，ＲＥＮ Ｂａｏｚｅｎｇ 一，ＷＡＮＧ Ｈｏｎｇｌｉ （１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｎｄ Ｅｎｅｒｇｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５０００１，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｈｅｎａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００５２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓ ｗｏｒｋ ｗａｓ ｃｏｎｃｅｉｖｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉｌ ｏｉａｌ ｆｒｏｍ ｆｒｅｓｈ ｖｅｔｉｖｅｒ ｒｏｏｔｓ ｂｙ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｃａｒｂｏｎ ｄｉｏｘｉｄｅ ｌｆｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（ＳＣＦＥ－ＣＯ２）．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｏｎｅ—ｆａｃｔｏｒ—ａｔ－ａ－ｔｉｍｅ（ＯＦＡＴ）ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｐｏｗｄｅｒｅｄ ｖｅｔｉｖｅｒ ｒｏｏｔｓ，ｖｏｌｕｍｅ ｃｈａｒｇｅ ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ，ｅｘｔｆｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ＣＯ２ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｎｄ ｅｘｔａｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｖｅｔｉｖｅｒ Ｏｉｌ．Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ，ｔｈｒｅｅ ｋｅｙ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｎｄ ａＣＯ２ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｉｚｅｄ ｍｂｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ）ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ ｄｅｓｉｇｎ ｕｓｉｎｇ ０ｉｌ ｙｉｅｌｄ ａｓ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｖａｒｉａｂｌｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｔｈａｔ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌ ｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙ，６０－８０ ｍｅｓｈ；ｖｏｌｕｍｅ ｃｈａｒｇｅ ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ，０．ｆ８；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ， ２２．６１ ＭＰａ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，３５．４１℃；ＣＯ２ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ，１．６５ Ｌ／ｍｉｎ；ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ，１．５ ｈ．Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ， ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｍａｘｉｍｕｍ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｖｅｔｉｖｅｒ ｏｉｌ ｗａｓ ７．７８０％，ａｇｒｅｅｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｖａｌｕｅ（７．７６２％）．Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＧＣ—ＭＳ．Ａ ｔｏｔｌ ｏｆ １ａ ８ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｈｉｃｈ ａｃｃｏｕｎｔｅｄ ｆｏｒ ６９．８８％ｏｆ ｈｅ ｔｏｔａｌ ｅｘｔｔｒａｃｔ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ８－ｃｅｄｒｅｎ一１３一ｏｌ，ｄｅｈｙｄｒｏ—ａｒｏｍａｄｅｎｄｒｅｎｅ，ｍｙｒｃｅｎｏｎｅ，ｖｅｔｉｖｅｒｏｌ ａｎｄ ｖｅｔｉｖｅｒｏｎｅ ａｓ ｈｅ ｔｍａｉｎ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｈｅｓｅ ｔｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｆｉｅｌｄｓ ｗｅｒｅ ｓｕｍｍａｒｉｚｅｄ ｉｎ ｈｉｓ ｗｏｒｋ．ｔ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ＣＯ２ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｖｅｔｉｖｅｒ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ； ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＧＣ－ＭＳ） 中图分类号：ＴＳ２０１ ｄｏｉ：１０．７５０６／ｓｐｋｘ１００２—６６３０－２０１５２００１４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２．６６３０（２０１５）２０．００７９．０７ 香根草（Ｖｅｔｉｖｅｒｉａ ｚｉｚａｎｉｏｉｄｅｓ），又名岩兰草，是一 种多年生禾本科岩兰草属植物，主要分布在一些亚热带 国家和我国南方地区ｕ ，是自然界根系最长的草本植物， 被称为“神奇之草”口 。香根草是一种优良的经济作物， 例如河南省南阳市将香根草引进长江以北地区，用于水 收稿日期：２０１５．０２．１１ 土保持、污水净化、综合开发等，以改造生态，并创造 经济效益，显现出了较好的效果。商品香根草种植采用 间隔轮伐方式，既起到了保持水土的作用，每年又可以 生产数万吨香根草原料资源。因此，香根草的综合开发 利用具有重要的现实意义。 作者简介：廖耀华（１９９０一），男，硕士研究生，研究方向为绿色化工与技术。Ｅ—ｍａｉｌ：１５５００２５７３＠ｑｑ．ｃｏｒｎ ￥通信作者：任保增（１９６２一），男，教授，博士，研究方向为绿色化工与技术。Ｅ．ｍａｉｌ：ｒｅｎｂｚ＠ｚｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ ８０ ２ｏ１５，ＶｏＬ３６，Ｎｏ．２０ 良晶科学 ※工艺技术 香根草根部富含岩兰草醇、萜烯类和一些倍半萜 （烯）类的化合物，经蒸馏或者萃取得到的香根草油具 有一定的食用、杀虫、灭菌、以及药用保健功能等”】， 是食品添加剂、香精、化妆品工业的重要原料。目前， 较为传统的蒸馏和有机溶剂法是香根草油的主要提取方 法。朱自仁等 采用常规有机溶剂浸提法制得了香根油浸 膏，该工艺产品仅为浸膏，所含蜡质等杂质较多且并未 取出，缺乏检测手段。龚德慎等 对贵州地区原产的香根 草用水蒸气长时间蒸馏１２ ｈ左右，后用石油醚回收产品， 得油率仅为０．８％，未对水蒸气蒸馏法进行工艺优化，得 率低，原料消耗量大，未能工业推广。文媛等 利用微波 萃取原理来破坏植物细胞结构，达到缩短萃取时间的目 的，并进行了有机溶剂的筛选。使萃取率有了一定程度 的提高，并对该方法的产品进行了化学成分分析测定， 但萃取率依然处于较低水平。Ｔａｌａｎｓｉｅｒ等 进行了乙醇作 夹带剂时压力对超临界ＣＯ，萃取香根草油收率的初步动力 学研究，进行了动力学模型的优选。但仅计算了在单一 萃取条件下（４０℃、２００ Ｂａｒ）的一些动力学参数，缺乏 普适性。Ｆｉｌｉｐｐｉ等 利用气相色谱和气相色谱一质谱（ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ，ＧＣ．ＭＳ）联用分析仪 等对市售不同产地香根草油的主要成分进行了较为系统 的鉴定，但仅列出了成分表，缺乏分析与总结。 本实验以人工种植的香根草为研究对象，在充分考察 单因素影响的条件下，选用Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ试验设计对其进 行了超临界ＣＯ：萃提研究并进行相关分析，寻找并确定了 萃取的最佳工艺参数，分析了萃取物的主要成分，以期为 香根草相关产品的开发研究提供一些可靠的理论依据。 １ 材料与方法 １．１ 材料与试剂 新鲜香根草根须产自河南南阳；ＣＯ，（食品级，纯 度＞９９．９％） 郑州市科益工业气体公司；无水乙醇 （优级纯） 天津市科密欧化学试剂有限公司。 １．２ 仪器与设备 Ｓｐｅ—ｅｄ ＳＦＥ Ｈｅｌｉｘ超临界萃取系统 美￣Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ公司；ＤＨＧ ９０７０Ａ型电热鼓风干燥箱 上海一 恒科学仪器有限公司；ＦＺ１０２型微型植物粉碎机 天津 市泰斯特仪器有限公司；ＪＹ３０２型电子天平 上海浦 春计量仪器有限公司；ＤＳＱ ＩＩ气质联用分析仪 美国 Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ公司。 １＿３ 方法 １．３．１ 萃取工艺流程 萃取设备流程图如图１所示，萃取工艺流程：新鲜香 根草根须一除杂一洗净～烘干一粉碎一过筛一装料一调 整萃取过程变量一超临界ＣＯ 萃取一减压加热分离一香根 草油。 １．ＣＯ 钢瓶：２．ＣＯ 加压泵；３空气压缩机：４．冷却 器；５．ＣＯ，预热器：６．夹套萃取釜；７．收集器；８．数显 流量计；ＰＩＣ．压力显示控制器；ＴＩＣ．温度显示控制器。 图１ Ｓｐｅ－ｅｄ ＳＦＥ Ｈｅｌｉｘ超临界流体萃取系统流程圈 Ｆｉｇ．Ｉ Ｆｌｏｗ ｃｈａｒｔ ｓｈｏｗｉｎｇ ｍｏｄｅｌ Ｓｐｅ－ｅｄ ＳＦＥ Ｈｅｌｉｘ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｌｆｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ １．３．２ 萃取釜最大装料量的测定及装料系数的计算 萃取釜最大装料量的测定：对于一定粒径的原料， 采用自然重力堆积方式，即将原料自然流入圆柱形萃取 釜内，不进行砸压操作 ，萃取釜的满装料量即为该粒径 原料的最大装料量。 装料系数计算见公式（Ｉ）００］ 装料系数＝ ｍｌ （１） 式中：ｍ。为萃取釜的最大装料量／ｇ；ｍ 为待萃物实 际装料量 。 １．３．３ 得率计算 得率／％： ｍｐ×１００ （２） 式中：ｍ 为香根草粉末的装料量／ｇ；ｍ。为萃取得到 香根草油的质量，ｇ。 １＿３．４ 单因素试验 为全面考察萃取过程，需要合理进行超临界ＣＯ 萃取 的主要控制变量选择Ｈ“。本实验选取香根草根须粉末粒 径、装料系数、萃取温度、萃取压力、ＣＯ，流率以及萃取 时间６个变量。各个因素分别进行单因素试验，每组平行 进行３次求平均值，以寻找每个因素的较优值。 １．３．５ 响应面优化试验 表１ 响应面试验因素与水平表 Ｔａｂｌｅ １ Ｖａｒｉａｂｌｅｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｕｓｅｄ ｉｎ Ｂｏｘ・Ｂｅｎｈｎｋｅｎ ｄｅｓｉｇｎ 根据单因素试验的结论，利用数学分析软件Ｄｅｓｉｇｎ— Ｅｘｐｅ￣８．０５ｂ的Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ试验设计，选取萃取压力、萃 取温度和ＣＯ 流率，考察各因素间的交互作用对得率的影 响，以香根草油得率为响应值，设计三因素三水平的响 ※工艺技术 艮晶科学 ２ｏｌｓ，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．２０ ８１ 应面试验，因素水平见表１（其余因素均选取单因素试验 确定的优值，即粒径６０￣８０目、装料系数０．８、萃取时间 １．５ ｈ）。 １．３．６ 验证实验 对响应面分析得到的预测最优条件进行实验验证， 实验平行进行３次，计算该条件下香根草油的平均得率， 并与预测值进行比较。 １．３．７ ＧＣ．ＭＳ联用分析超临界萃取香根草油 萃取所得香根草油用无水乙醇稀释。 色谱条件：配备Ｇ Ｓ Ｂ Ｐ．５ Ｍ Ｓ毛细管柱 （３０ ｍ×０．２５ ｍｍ，０．２５ ｇｍ）；升温程序：起始温度 ５０℃，以１５℃／ｍｉｎ升至１８０℃，后以１℃／ｍｉｎ至２００℃， 再以１５℃／ｍｉｎ至２６０℃，保持３ ｍｉｎ；高纯氦气做载气， 柱流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ；进样口温度２５０℃，分流比２０：１，溶 剂延迟时间３．２ ｍｉｎ。 质谱条件：电子电离源７０ ｅＶ；接口温度２５０℃；离 子源温度２５０℃；质量扫描范围ｍ／ｚ ４０￣６５０。 ２ 结果与分析 ２．ｉ 单因素试验结果 ２．１．１ 粒径对香根草油得率的影响 设定装料系数Ｏ．８、萃取温度４５℃、萃取压力 １０ ＭＰａ、ＣＯ，流率１ Ｌ／ａｒｉｎ、萃取时间２ ｈ，粒径采用２０目 以下、２０￣４０、４０￣６０、６０￣８０目以及８０目以上这５个 水平进行试验，结果见图２。 图２ 粒径对香根草油得率的影响 Ｆｉｇ．２ ＥｆｆｅｃｔｏｆｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｇｒａｎｕｌａｒｉｔｙｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｖｅｔｉｖｅｒｅｓｓｅｎｔｉａｌｏⅡ 如图２所示，随着物料粒径的变化香根草油得率变化 非常显著：随着粒径目数范围的增加，得率呈现先升后 降的趋势，当粒径在６０￣８０目范围区间时，得率达到最 大值。原料的颗粒粒径的大小与超临界ＣＯ：流体和待萃取 物料的接触面积大小直接相关，从而直接影响最终的得 率。根据传质原理，原料粒径越小，利于ＣＯ 向物料内部 迁移，从而增强了传质效果¨ ；且物料粒径越小，其细 胞的破损程度越高 ，这两方面的因素都有利于萃取。 但粒度过小会增加表面流动阻力，甚至产生沟流现象， 反而不利于萃取 。因此根据试验结果，最适宜的粒径 范围为６０￣８０目。 ２．１．２ 装料系数对香根草油得率的影响 在对天然物质进行超临界ＣＯ 萃取的过程中，必须 考虑到物料会发生不同程度的溶胀现象，膨胀的程度与 萃取温度、萃取压力和物料本身的性质等有关。为了防 止由于溶胀导致的釜内局部压强过高或憋压等安全隐患 的出现，必须在萃取釜内预留出一定的安全空间，确保 操作安全。同时装料量的多少也会影响物料的堆积密度 和ＣＯ 的扩散阻力等，对得率有直接影响 。因此需要考 察物料装料系数的影响。首先测定萃取釜中全体积填料 时的最大装料量，对于粒径为６０￣８０目的物料，容积为 ５０ ｍＬ的萃取釜最大装料量为５．６７ ｇ。 选取粒径范围粒径６０～８０目、萃取温度４５℃、萃 取压力１０ ＭＰａ、ＣＯ，流率１ Ｌ／ｍｉｎ、萃取时间２ ｈ，装料 系数０．５、０．６、０．７、０．８、０．９这５个水平进行试验，结果 见图３。 装料系数 图３ 装料系数对香根草油得率的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｖｏｌｕｍｅ ｃｈａｒｇｅ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｎ ｈｔｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｖｅｔｉｖｅｒ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ 由图３可以看出，装料系数与得率之间存在一定的相 关关系。装料系数较小及较大的情况下得率均偏低，综 合考虑得率与设备生产安全、利用效率等因素，装料系 数选取０．８为宜。 ２．１．３ 萃取温度对香根草油得率的影响 设定粒径６０～８０目、装料系数０．８、萃取压力 １０ ＭＰａ、ＣＯ，流率ｌ Ｌ／ｍｉｎ、萃取时间２ ｈ，萃取温度选取 ３５、４０、４５、５Ｏ、５５℃５个水平进行试验，结果见图４。 僻 萃取温度／￣Ｃ 图４ 萃取温度对香根草油得率的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｔｈｅｙｉｄｄｏｆｖｅｌｉｖｅｒｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌ ８２ ２０１５，Ｖｏｉ．３６，Ｎｏ．２０ 良品科学 ※工艺技术 超临界ＣＯ，流体的温度对萃取过程的影响是多方面 的，这是因为超临界流体以及待萃物的理化性质如Ｃｏ 流体黏度和溶质溶解度等都和温度直接有关“ 。由图４ 可知，萃取温度对香根草油的萃取得率影响显著，在 ３５￣４０℃范围内得率较高且变化幅度较小，温度达４０℃ 以上萃取率急剧下降。这说明香根草油的超临界萃取过 程对温度的变化敏感。因此萃取温度取３５℃左右为宜。 ２．１．４ 萃取压力对香根草油得率的影响 设定粒径６０￣８０目、装料系数０．８、萃取温度３５℃、 ＣＯ，流率１ Ｌ／ｍｉｎ、萃取时间２ ｈ，萃取压力选取１０、１５、 ２０、２５、３０ ＭＰａ ５个水平进行试验，结果见图５。 槲 贬 萃取压力，ＭＰａ 图５ 萃取压力对香根草油得率的影响 Ｆｉｇ．５ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｖｅｔｉｖｅｒ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌ 萃取压力主要会影响超临界流体的密度 ，从而 对得率产生影响。由图５可知，在其他条件不变的情况 下，随着压力的升高，超临界流体密度增大，同时相对 减少了传质距离和传质阻力，有利于萃取过程；当压力超 过一定数值后，超临界压力越高，ＣＯ，流体密度和黏度过 大，传质的效果反而变差，还会影响萃取的选择性“ ，并 且实际生产中高压存在一定安全隐患。适宜的萃取压力 为２０ ＭＰａ，这也与文献【７，２０］报道的结论一致。 ２．１．５ ＣＯ，流率对香根草油得率的影响 本研究中超临界萃取设备的流率监测点位于ＣＯ， 排空口处，即为常温常压条件下的ＣＯ，体积流率。本实 验选取ＣＯ，流率分别为１．０、１．５、２．０、２．５、３．０ Ｌ／ｍｉｎ （即６０～１８０ Ｌ／ｈ范围），进行单因素试验，设定粒径 ６０～８０目、装料系数０．８、萃取温度３５℃、萃取压力 ２０ ＭＰａ、萃取时间２ ｈ进行萃取，结果见图６。 图６ ＣＯ：流率对香根草油得率的影响 Ｆｉｇ．６ ＥｆｆｅｃｔｏｆＣＯ２ｆｌｏｗｒａｔｅＯＨｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆｖｅｔｉｖｅｒ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ棚 由图６可知，当ＣＯ，流率在１。Ｏ～１．５ Ｌ／ｍｉｎ范围内时， 香根草油得率随着ＣＯ，流率的增加而增加，且流率为 １．５ Ｌ／ｍｉｎ时得率最大。ＣＯ，流率继续增加，得率逐渐降 低。ＣＯ，流率对萃取的影响是一个相对比较复杂的过程 ［２１１。总体来说增大流率有利于萃取，但流率过大时可能 造成ＣＯ，气化排空与产物分离的过程中分离不彻底，反而 降低了得率。因此根据试验结果综合考虑，ＣＯ 流率在 １．５ Ｌ／ａｒｉｎ（９０ Ｌ／ｈ）左右为宜。 ２．１．６ 萃取时间对香根草油得率的影响 在粒径６０～８０目、装料系数０．８、萃取温度３５℃、 萃取压力２０ ＭＰａ条件下，ＣＯ，流率在单因素最优点附近 选取１．０、１．５、２．０ Ｌ／ａｒｉｎ ３种，考察萃取时间对得率的影 响，结果见图７。 蒋 翠取时间，｝ｌ 图７ 萃取时间对香根草油得率的影响 Ｆｉｇ．７ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｔｌｌｌｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆｖｅｔｉｖｅｒ ｅｓｓｅｎｔｉｌａ ｏｊｌ 由图７可知，在最佳ＣＯ 流率及其附近区间内，得 率均随着萃取时间的延长而单调递增。当萃取时间大于 １．５ ｈ时，得率的增加明显减缓，并且随着时间的进一步 延长，在２ ｈ以后得率几乎不再增加。１．５～２ ｈ时间段内， 得率增加量均小于０．３％，同时进一步增加了时间成本以 及能耗，实际生产中意义不大。因此，综合考虑，萃取 时间在１．５ ｈ为宜。 ２．２ 响应面试验结果 ２．２．１ 试验结果与方差分析 综合单因素试验的结果，选取萃取压力、萃取温 度、ＣＯ 流率这３个对得率影响较大的因素，分析它们交 互作用对得率的影响。采用三因素三水平的响应面分析 方法，选用Ｂｏｘ．Ｂｅｈｎｋｅｎ模型进行试验设计，响应面试验 方案与结果见表２。 表２中，第３、６、９、１１、１３号为中心（零点）试 验，其余１２组为析因试验。零点试验共计重复进行 ５次，用以计算试验随机误差。根据试验结果，利用 Ｄｅｓｉｇｎ．Ｅｘｐｅｒｔ ８．０．５ｂ软件对所得数据进行方差分析，结 果见表３。３个因素经过拟合得到Ｙ（得率）的二次多元 回归方程为：Ｙ＝７．６８＋０．１６，４＋０．０５９Ｂ＋０．１６Ｃ＋０．１ １ — ０．００５ Ｃ一０．２３ Ｃ一０．１００ ０—０．３１ 一０．２Ｏ 。 ※工艺技术 表２ 响应面试验设计及结果 Ｔａｂｌｅ ２ 匡 班目 ２０１５，ＶｏＬ３６，Ｎｏ，２０ ８３ ２．２．２ 各因素交互作用响应面分析 Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ ｄｅｓｉｇｎ ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 冰 褂 表３ 回归方程方差分析表 Ｔａｂｌｅ ３ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｏｆ ｑｕａｄｒａｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ 褂 图８ 两因素交互作用对香根草油收率的影响 Ｆｉｇ．８ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌｏｔ ａｎｄ ｃｏｎｔｏｕｒ ｐｌｏｔ ｓｈｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｆ ｏｔｈｒｅｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｖｅｔｉｖｅｒ ｏｉｌ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｙｉｅｌｄ 由图８可知，萃取温度与ＣＯ，流率的交互作用对香根 草油得率的影响最为显著，体现为三维响应面图中曲面 的弯曲程度较大、曲线较陡【２ ，三维图底部的等高线呈 椭圆形；萃取压力和萃取温度的交互作用次强：而萃取 注： ．差异极显著（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）； ．差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５） 压力与ＣＯ，流率的交互作用最弱，表现为三维响应曲面较 为平缓，底部等高线接近正圆形。利用拟合方程确定最 由表３可知，该二次多项式回归模型的Ｆ值为 １Ｏ．９５，Ｐ＝Ｏ．００２ ３，达到了极显著水平，证明该模型可 以很好地描述各个变量与响应值之间的变化关系。相 关系数 ＝０．９３３ ７，说明香根草油得率的试验值与利用 佳工艺条件的方法如下：对回归方程的各个因素均取一 阶偏导数为０，联立即可求得香根草油得率达到最高时所 需的参数条件，￣ｒＪＡ＝０．８７０，Ｂ＝０．１３６，Ｃ＝０．３０５，换算成 实际值即为萃取压力２２．６１ ＭＰａ、萃取温度３５．４ｌ℃、ＣＯ， 流率１．６５ Ｌ／ｍｉｎ，预测香根草油得率达到７．７８０％。 ２．２．３ 验证实验结果 该方程得到的预测值之间非常接近，拟合程度较高。 同时方程的失拟项远未达到显著水平，因此可用该回 归方程代替试验真实点对结果进行分析和预测 。从 分析中还可看出一次项 、Ｃ差异均达到极显著水平。 在所确定的试验水平范围内，各因素对响应值的影响 为了验证本方法所确定的拟合方程的可靠性及实际 应用价值，采用上述最佳工艺条件进行实验验证，考虑 到所用仪器设备所能达到的条件控制精度水平和操作方 便，在验证实验中将香根草油的超临界ＣＯ，萃取的最佳条 件修正为萃取压力２２．６ ＭＰａ、萃取温度３５．４℃、ＣＯ，流率 １．６ Ｌ／ｍｉｎ（其余条件均取单因素试验最优值）进行３次验 程度顺序为：Ａ＞Ｃ＞Ｂ，即萃取压力＞ＣＯ，流率＞萃取 温度。３个因素中，萃取温度和ＣＯ，流率之间有极显著 的交互作用。 证实验，实际测得香根草油萃取的平均得率为７．７６２％， ８４ ２０１￣Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．２０ 食晶科学 ※工艺技术 与理论预测值相比，绝对误差小于０．０１９％。由此可见， 采用响应面法优化得到的超临界ＣＯ，萃取香根草油的参数 准可靠，具有一定应用价值。 ２＿３ 香根草油的ＣＡ２．ＭＳ分析结果 在最优工艺参数条件下，对超临界萃取出的香根草 油进行了ＧＣ．ＭＳ分析。利用ＮＩＳＴ数据库进行比对并配合 人工谱图解析，对各个色谱峰进行了分析。香根草油成 分复杂，分析难度较大，因其绝大部分成分为倍半萜类 化合物及其氧化物 】，故鉴定过程中着重分析该类化合 物，且成分检索过程中取值正向检索匹配指数（ｓｅａｒｃｈ ｉｎｄｅｘ，ＳＩ）及反向检索匹配指数（ｒｅｖｅｒｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｉｎｄｅｘ， ＲＳＩ）均不小于７００为可靠匹配结果，并利用面积归一化 法确定其百分含量，结果见表４（未列出ＳＩ值或ＲＳＩ值小 于７００的色谱峰鉴定结果）。鉴定出的１８种成分总含量占 总萃取物的６９．８８％，且多为各种食品添加剂、香料、中 草药的有效组分。 表４ 超临界ＣＯ：萃取香根草油的化学成分分析 Ｔａｂｌｅ ４ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｉｔｏｎ Ｏｆｖｅｔｉｖｅｒ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏ．１ 在鉴定出的各主要成分中，有一定药用研究价值的 化合物及其功效介绍如下：雅榄蓝烯是独活、山苍子等 传统中药材的主要成分，也常见于烟叶中，具有活血消 肿、祛寒止痛的功能瞄 ； ．桉叶油醇是中药苍术的主 要活性成分，具有燥湿健脾、祛风散寒、止泻及明目等 功效 ；螺【环丙烷．１，８．桥亚甲基．３ａｈ 环辛烯】庚酮和７．羟 基一１，ｌ，４，７．四甲基八氢化苯基环庚烯在中药五味子的挥发 油中均有检出，且７．羟基。１，１，４，７．四甲基八氢化苯基环庚 烯在五味子挥发油中的含量达３５．０６％，是该挥发油的主 要成分，其药理功效还有待于进～步研究田＿２８】；６【．愈创木 烯在广藿香、苍术、人参、三七等药材中均有检出，有 一定的抗菌抗肿瘤功 矧。 可作为食品添加剂或香料、化妆品调香剂的化合物及 其香气特征介绍如下：异喇叭烯具有花香，存在于腊梅、 荣莉等花朵精油中，是茉莉花的主要赋香成分，决定了其 香气浓度的基础 ｌ；香根醇、香根酮是香根草特有的成 分，由于突出的根香、壤香，故在配制东方型、海洋型、 森林型、田园型香精中有特殊的作用【３ ；柏木烯醇具木香 和膏香，气味温和，留香持久，多用于化妆品、洗涤用 品、膏霜类等日化香精，少量用于食用和烟用香精；脱氢 香橙烯有木香、橘香等香气 ；月桂烯酮是一种香料中间 体，可用来人工合成一些稀有名贵香料 ｌ。 ３ 结论 在单因素试验的基础上，利用Ｄｅｓｉｇｎ—Ｅｘｐｅｒｔ软件， 选择Ｂｏｘ．Ｂｅｈｎｋｅｎ试验设计法对超临界ＣＯ，流体萃取香根 草油工艺进行设计并优化。结果表明，萃取压力、ＣＯ 流率对香根草油得率的影响极显著，其中萃取温度和ＣＯ Ⅲ 流率之间存在极显著的交互作用。利用响应面分析方法 所建立的数学模型对超临界ＣＯ，萃取香根草油的工艺条 件进行优化，可获得最优的工艺参数，即为萃取压力 ２２．６１ ＭＰａ、萃取温度３５．４１℃、ＣＯ，流率１．６５ Ｌ／ｍｉｎ，预 测香根草油得率达到７．７８０％。在此工艺条件下做验证实 验，香根草油得率为７．７６２％，高于文献［３５１报道的水蒸馏 法、溶剂萃取法得率。 利用ＧＣ．ＭＳ对超临界方法得到的香根草油进行了成 分分析，基本确定了其主要成分，主要包含柏木烯醇、 脱氢香橙烯、月桂烯酮以及香根草特有的香根醇、香根 酮等化合物，并按照应用领域对香根草油的主成分进行 了分类，为香根草油进一步开发利用提供了相关依据。 参考文献： 刘金祥，陈燕．我国大陆惟一的大面积成群落分布的优良水土保持 植物：香根草的用途与保护问题【Ｊ】．草业科学，２００２，ｌ９（７）：１３—１６． 徐礼煜．香根草系统在我国的应用与发展２０年历程回顾［Ｊ］．生态学 杂志，２００９，２８（７）：１４０６—１４１４． 毛萍，杨宏，马欣荣．香根草的研究及利用进展【Ｊ】．中国农业科技导 报，２０１ １，ｌ３（１）：８８—９３． 朱自仁，何有昌，张淑．香根油的提取和浸膏的试制试验报告【Ｊ］．四 川日华，１９９０，４（１）：１３—１５． 龚德慎，魏德生，钟雁，等．黔产香根油的研究［Ｊ】．贵州科学，１９９７， １５（２）：１２６－１３０． 文嫒，王飞生，赵鹏飞，等．微波辅助法提取香根净油的研究【Ｊ】．广 州化学，２００９，３４（３）：８－１１． ＴＡＬＡＮＳＩＥＲ Ｅ，ＢＲＡＧＡ Ｍ．Ｓｕｐｅｒｃｆｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｔｉｖｅｒ ｒｏｏｔｓ：ａ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＳＦＥ ｋｉｎｅｔｉｃｓ【Ｊ】．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄｓ， ２００８，４７（２）：２００－２０８． ＦＩＬＩＰＰＩ Ｊ，ＢＥＬＨＡＳＳＥＮ Ｅ．Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖｅｔｉｖｅｒ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌｓ ｂｙ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉ ｖｅ ｔｗｏ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｔｗｏ—ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｇａｓ ※工艺技术 … 食品科学 ２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．２０ ８５ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， ２０１３，１２８８（５）：１２７—１４８． 王贤，薛文通．超临界ＣＯ２萃取小麦胚芽油的试验研究［Ｊ】．中国农业 大学学报，２００３，８（２）：５８．６０． 王玉琪，陈开勋，姚瑞清，等．超临界萃取法制各辣椒红色素［Ｊ］．化 学工程，２００８，３６（８）：９－ｌ２． ＭＥＬＯ Ｍ，ＳＩＬＶＥＳＴＲＥ Ａ．Ｓｕｐｅｒｃｒｉｉｔｃａｌ ｌｆｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｍａｔｒｉｃｅｓ：ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｔｒｅｎｄｓ ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｏｆ ａ ｃｏｎｖｉｎｃｉｎｇ ｇｒｅｅｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｈｕｉｄｓ，２０１４，９２（８）： １ １５．１７６． 陈芹芹，李景明，胡雪芳，等．响应面法优化超ｌＩ螽界ＣＯ 流体萃取苹 果籽油的工艺研究［Ｊ】．食品科学，２００９，３０（１４）：４７—５１． ＫＨＡＪＥＨ Ｍ，ＹＡＭＩＮＩ Ｙ。ＳＥＦＩＤＫＯＮ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ０ｉｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｕｍ ｃｏｐａｃｕｍ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｓｕｐｅｍｒｉｔｉｃａｌ ｃａｒｂｏｎ ｄｉｏｘｉｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，８６（４）：５８７－５９１． 杨继红，李元瑞，蒋晶．苹果籽油的超临界ＣＯ 萃取及其脂肪酸含量 分析［Ｊ】．西北农林科技大学学报：自然科学版，２００７，３５（３）：１９５—１９９． 杨继红．苹果籽油ＣＯ 超ｌｌ缶界萃取及微胶囊化研究［Ｄ】．杨凌：西北 农林科技大学，２００６． 刘振春，范国婷，苏彤，等．响应面法优化超ｌ临界ｃ０ 萃取亚麻籽木 脂素［Ｊ】．食品科学，２０１３，３４（１ｏ）：８２—８５．ｄｏｉ：１０．７５０６／ｓｐｋｘ１００２—６６３０． ２０１３ｌ００ｌ８． ＡＧＩＩＩＡＲＡ，ＳＡＮＴＤｌｓＰ，ＣＣ 丌＝ＩＮＨＯＪ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌｆｌｕｉｄｅｘ￣ａｅｌｉｏｎ ａｎｄｌｏｗ舯 ｕｒｅｅｘｔａｒｃｔｉｏｎｏｆＢｉｑｕｉｎｈｏｐｅｐｐ￣ ｃｈ／ｎｅｎｓｅ［￣．１ｗＴ＿ ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｅｌ＇ｍｏｔｏｇｙ，２０１４’５９ｃ２）：ｌ２３９－１２４６． ＣＨＥＵＮＧ Ｃ．Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｃａｒｂｏｎ ｄｉｏｘｉｄｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎ－３ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｆｒｏｍ ｒｅｄ ｓｅａｗｅｅｄ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９９，６５（３）：３９９—４０３． 李杰．超临界ＣＯ 萃取鸡矢藤中有效成分的工艺研究【Ｄ】．郑州：郑 州大学，２０１２． ＭＡＲＴＩＮＥＺ Ｊ．ＲｏＳＡ Ｐ．ＭＥＮＵＴ Ｃ．Ｖａｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｒａｚｉｌｉａｎ ｖｅｔｉｖｅｒ（Ｖｅｔｉｖｅｒｉａ ｚｉｚａｎｉｏｉｄｅｓ（Ｌ．）Ｎａｓｈ Ｓｍａｌ１）ｏｉｌ［Ｊ】．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｌａ ｎａｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４，５２（２１）：６５７８—６５８４． 孙振江．超临界ＣＯ 萃取柠檬精油的工艺研究【Ｄ】．西安：西北大 学．２０１２． 沈懋文，邵亮亮，侯付景，等．响应面法优化杭白菊花精油的提取工 艺及其化学成分研究【Ｊ】．食品科学，２０１０，３１（１０）：１０１—１０５． 杨虎，高国强．超临界ＣＯ 萃取及气质联用分析沙枣花精油成分［Ｊ］． 食品科学，２０１３，３４（１４）：１５２—１５６．ｄｏｉ：１０．７５０６／ｓｐｋｘ１００２．６６３０． ２０１３１４０３１． 朱艳．不同产地独活有效成分的比较【Ｄ】．沈阳：辽宁中医药大 学，２００７． 斯林林．山苍子油化学成分及其ＧＣ—ＭＳ指纹图谱研究【Ｄ］．合ＪＥ：安 徽农业大学。２０１３． 甄毕贤，才谦．苍术中 桉叶油醇和茅术醇的分离制备研究［Ｊ］．亚太 传统医药，２０１ １，７（１２）：１７．１８． 李听，聂晶，高正德，等．超声微波协同水蒸气蒸馏．ＧＣ．ＭＳ分析 南、北五味子挥发油化学成分【Ｊ］＿食品科学，２０１４，３５（８）：２６９—２７４． ｄｏｉ：１０．７５０６／ｓｐｋｘ１００２—６６３０—２０１４０８０５４． 赵秀英．五昧子挥发油成分气相色谱．质谱分析［Ｊ］．天津化工，２０１４， ２８（６）：５３・５４． 黄烈军．中药广藿香化学及生物活性成分研究［ＤＩ．贵阳：贵州大 学．２００８． 沈强．腊梅花精油提取工艺及成分比较［Ｄ】．重庆：西南大学，２００９． 郭素枝，张明辉，邱栋梁，等．３个茉莉品种花蕾香精油化学成分的 ＧＣ－ＭＳ分析［Ｊ】．西北植物学报，２０１ １，３ｌ（８）：１６９５—１６９９． 文瑞明．香料香精手册［ＭＩ．长沙：湖南科学技术出版社，２０００：１ １７．１ １８ 刘胜辉，魏长宾，孙光明，等．三个菠萝品种成熟果实的香气成分分 析［Ｊ】．食品科学，２００８，２９（１２）：６１４－６１７． 王金娥，朱岳膦，熊常健．月桂烯的来源及其在香料化学中的应用［Ｊ】． 山东化工，２０１１，４０（３）：４７—５０． 文嫒，王飞生，赵鹏飞。等．香根油提取工艺研究进展［Ｊ１．清远职业 技术学院学报，２０１０，３（３）：１８—１９．