林业科学 现代农业科技２０１２年第８期 血皮槭快繁过程中外植体褐化研究 陈丽李冰牛小沛王梅王欣欣田瑞昌 （河南省济源市农业科学研究所，河南济源４５４６５０） 摘要 对血皮槭快繁中外植体褐化问题进行初步研究，结果表明：于６月采集嫩茎进行培养，分化高、褐化少：培养基中蔗糖浓度为 ２５％、６一ＢＡ浓度为１．８ ｍｇ／Ｌ时褐化少；培养基中加入１．２ ｇ／Ｌ Ｎａ２ｓ２０３对防止褐化、提高腋芽萌发率有促进作用。 关键词血皮槭：褐化：快繁 中图分类号Ｑ９４９．７５５．３ 文献标识码Ａ 文章编号１００７—５７３９（２０１２）０８—０１９８一Ｏ１ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｂｒｏｗｎｉｎｇ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ｏｆ Ａｃｅｒ ｅｒｉｓｅｕｍ（Ｆｒａｎｃｈ．）Ｐａｘ Ｅｘｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣＨＥＮ Ｌｉ ＬＩ Ｂｉｎｇ ＮＩＵ Ｘｉａｏ—ｐｅｉ ＷＡＮＧ Ｍｅｉ ＷＡＮＧ Ｘｉｎ－ｘｉｎ ＴＩＡＮ Ｒｕｉ—ｃｈａｎｇ （Ｊｉｙｕａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｊｉｙｕａｎ Ｈｅｎａｎ ４５４６５０） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎ ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｉｎ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｏｆｔｈｅＡｃｅｒｇｒｉｓｅｕｍ（Ｆｒａｎｃｈ．）Ｐａｘ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｈｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｎｅｗ ｔｅｎｄｅｒ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ａｐｒｉｌ ｈａｄ ｓｅｖｅｒｅｒ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ａｎｄ ｈｉｇｈｅｒ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｅｌｐ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｓ ａｄｄｅｄ ａｔ ｐｒｏｐｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ （ｄｅｒｔｒｏｓｅ ２５％，６一ＢＡ １．８ｍｇ／Ｌ），ｅｘｐｌａｎｔｓ ｃｏｕｌｄ ｈａｖｅ ａ ｂｅｔｔｅｒ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆａｕｘｉｌｉａｒｙ ｂｕｄｓ，ｗｉｔｈｔｈｅ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｐｈｅｎｏｍｅｎａｌｅｓｓｅｎｅｄ．Ａｄｄｉｔｉｏｎｏｆ１．２ ｇ／Ｌ Ｎａ２Ｓ２０３ ｔｏ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｕｌｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｐｒｅｖｅｎｔ Ａ ｃｅｒ ｇｒｉｓｅｕｒｎ（Ｆｒａｎｅｈ．）Ｐａｘ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｂｒｏｗｎｉｎｇ，ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｈｏｏｔ ｇｒｏｗｔｈ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ａｃｅｒｇｒｉｓｅｕｍ（Ｆｒａｎｃｈ．）Ｐａｘ：ｂｒｏｗｎｉｎｇ：ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ 血皮槭为槭树科槭树属特产植物，又是国家二级保护树 １．３试验方法 种，树高和冠幅均可达到６－９ ｍ，树冠呈圆形。血皮槭繁殖较 １．３．１血皮槭外植体的消毒和接种方法。取无病虫害发生的 一难，为我国濒危树种【１］。血皮槭快繁过程中，外植体的褐变问 题是影响培养成功的关键因素。褐化现象是由于植物组织细 胞中的酚类物质被氧化，产生棕褐色的醌类物质，导致组织 的变褐。在离体培养过程中，这类物质扩散到培养基中，抑 制了外植体的生长，导致植物死亡『２＿３１。因此，在血皮槭外植 体培养中，其培养成功的关键是防止褐化。从外植体的选择 时间、培养基成分以及抗氧化剂的添加方面对血皮槭快繁中 外植体褐化以及生长进行初步研究，现将研究结果报告如下。 １材料与方法 １．１试验材料 年生枝条（带叶）用流水冲洗５ ｈ，并用洗洁净水冲洗数 次。在无菌操作下对材料的表面进行灭菌，先后选用７５％ 酒精消毒３０ Ｓ、无菌水冲洗１次、０．１％氯化汞灭菌１８ ｍｉｎ （添加时不停地摇动）、无菌水冲洗８次。灭菌结束后用无菌 滤纸吸干水分，将嫩茎切成小段作为外植体，为便于接种， 小段应带有１个腋芽 １．３．２培养基以及培养条件。试验中所用的培养基为改良 ＭＳ添加不同浓度的激素、蔗糖，０。５％琼脂，ｐＨ值６．０。接种 后培养温度为（２５￣２）℃，光照２ ５００ｌｘ，光照时间１２ ｈ／ｄ，每 天观察，发现污染的应及时取出。 ２结果与分析 ２．１不同时间采摘外植体对血皮槭褐化以及生长的影响 供试材料为河南省济源市农业科学研究所中生长健壮 的一年生血皮槭幼嫩枝条，改良ＭＳ培养基，７５％酒精，无菌 水，０．１％氯化汞，无菌滤纸，不同浓度的激素、蔗糖，０．５％琼 脂等。 １．２试验设计 对不同时间段采摘的外植体进行培养试验，结果如表２ 所示。可以看出，不同时间采摘的外植体，其生长和褐化的 程度不同，４—５月采摘的外植体褐化较少，但是分化也少； ７—８月采摘的外植体褐化率较高，６月采摘的外植体褐化 少，且分化高。 表２不同时间采摘外植体对血皮槭褐化以及分化的影响 １．２．１不同时间采摘外植体对血皮槭褐化以及生长的影响 试验。分别在４、５、６、７、８月接种２０个外植体，观察其腋芽 萌发率、褐化率、褐化死亡率。 １．２．２培养基中蔗糖浓度和６－ＢＡ浓度对血皮槭褐化的影 响试验。试验设计蔗糖和６－ＢＡ ２个因素４个水平的正交试 验，具体如表１所示。 表１蔗糖和６－ＢＡ Ｌｌ６（４２）正交设计 ２．２不同浓度蔗糖、６一ＢＡ培养基对血皮槭褐化的影响 正交试验结果表明，当蔗糖浓度为２５％、６－ＢＡ浓度为 １．２．３培养基中抗氧化剂对血皮槭外植体褐化的影响试 验。试验以改良ＭＳ＋６一ＢＡ １．８ ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ ０．８ ｍｇ／Ｌ为基本 １．８ ｍｇ／Ｌ时，血皮槭外植体褐化最少，分化较好，苗壮。如在 接种后的第２天发现接种在培养基上的外植体外侧出现黑 培养基（对照）；分别加入１－０、ｌ２、１４ Ｌ的硫代硫酸钠（Ｎａ２ｓ：０，）。 分析不同处理对外植体褐化的影响。 收稿日期１９８ 红色．则表明其易发生褐化现象，及时将之转接，可防止导 致褐化死亡。 （下转第２０６页） ２０ｌ２—０２—２８ 林业科学 现代农业科技２０１２年第８期 做好芦荟的越冬管理工作尤其重要。盆栽芦荟可移至室内 病害发生后，直接施用托布津、瑞毒霉、硫酸链霉素、农 或温室越冬。要控制浇水和增加光照。若湿度很低，可在晴 用链霉素、春雷霉素、井冈霉素等，以杀灭病原菌，控制病害 天９：Ｏ０后移出，１５：００前移入室内。另外，还可在盆株之外 蔓延。 加套一层塑料膜，这样既能使芦荟得到阳光照射．又能提高 ３参考文献 温、湿度。效果较好。 【１】王力川．芦荟叶主要化学成分及其功效的研究进展【Ｊ］．畜牧与饲料科 ２．５．４常见病害防治。芦荟的常见病害主要有炭疽病、褐斑 学，２００９（１）：２５—２７． 病、叶枯病、白绢病及细菌性病害。在病害未发生前或已发 【２】邢继岩．家庭栽培芦荟技术［Ｊ】＿吉林蔬菜，２０１１（３）：８Ｏ． 【３芦荟的盆栽方法与日常养护【３］Ｊ］．中国农村科技，２０１１（２）：７９． 病的植株去除带病部位后，叶面喷洒石灰等量式波尔多液（硫 ［４】徐晔春，朱颖．家庭保健花卉栽培与应ｍ ＥＪ］．南方农业：园林花卉版， 酸铜０．５～０．８ ｋｇ＋石灰０．５～０．８ ｋｇ＋水１００ ｋｇ），可有效预防、抑 ２０１０（４）：６７—７０． 【５】曾朝晖，方灵元．库拉索芦荟的室内盆栽技术及应用［Ｊ】＿中国园艺文 制病菌侵入和蔓延。 摘。２ＯＬＯ（３）：９１—９３． ・—・ ＊— －＋－＋ （上接第１９８页） 嫩茎容易诱导出愈伤组织，可能与该部位的细胞相对生命 ２－３抗氧化剂对血皮槭外植体褐化的影响 力比较强，存在居间分生组织有关系 。６月采摘的材料．茎 如表３所示，当培养基中不添加ＮａＥＳ２０ 时，其腋芽萌 段已半木质化，多酚氧化酶已经降低，同时形成的腋芽较为 发率低，褐化率及死亡率高。添加１．２ ｇ／Ｌ Ｎａ２Ｓ２０，时，防止褐 饱满，接种后芽易萌化嘲。根据细胞的全能性学说，所有的活 化效果最好，褐化率仅为２６％，褐化死亡率为３０％。 细胞都可以脱分化，但是在实际的实践中，幼嫩、生命力强 表３不同浓度Ｎａ２Ｓ：Ｏ 对血皮械褐化的影响 的分生组织，包括居间分生组织比较容易诱导出愈伤，而较 老的组织则较难诱导愈伤。 在培养基中添加抗氧化剂或酚类物质吸附剂是防止外 植体褐化的常用方法网。韩碧文等进行核桃的组织培养试验 中，在培养基中加入１２７ ｍｏＦＬ Ｎａ２ｓ：Ｏ，，对免除培养物被酚 类化合物氧化污染和提高成功率的作用很大用。该试验结果 ３结论与讨论 中显示Ｎａ２ｓ：Ｏ 防止褐化的效果较好。说明在植物中由于取 血皮槭快繁过程中对外植体褐化研究的结果表明：不 材的遗传因素及生理状态不同，对防止外植体褐变采用的 同时间采摘的外植体，其生长和褐化的程度不同．４—５月采 方法不同，效果也不同。 摘的外植体褐化较少，但是分化也少；７—８月采摘的外植体 ４参考文献 褐化较高，６月采摘的外植体褐化少，且分化高；当蔗糖浓度 …１曹小勇．槭树科槭属植物形态学研究【ＪＪ．汉中师范学院学报：自然科 为２５％、６一ＢＡ浓度为１．８ ｍｇ／Ｌ时．血皮槭外植体褐化最少， 学版，２０００，１８（２）：６９—７２． 分化较好，苗壮；添加１．２ ｇ，ＬＮａ２Ｓ２ｏ］时，防止褐化效果最 【２】高国训．植物组织培养中褐变问题【Ｊ】．植物生理通讯，１９９９，３５（６）： ５０１—５０６． 好，褐化率仅为２６％，褐化死亡率为３０％。 ［３］３张小红．核桃离体培养中外植体褐化的研究［Ｊ］．陕西林业科技，２００５ 在试验中发现，添加不同浓度的蔗糖和６一ＢＡ对血皮槭 （４）：７—９． 组培苗的生长起到很大的作用．添加一定量的６一ＢＡ对愈伤 【４］谭文澄．观赏植物组织培养技术【Ｍ］．北京：中国林业出版社，２００１． ［５】刘兰英．薄壳香核桃组培中的褐化及防止措施研究［Ｊ］．园艺学报， 组织的形成和组培苗的生长有促进作用．反之则抑制培养。 ２００２，２９（２）：１７１－１７２． 在植物组织培养中，外植体的褐变是导致培养失败的主要 ［６】孔祥生，张妙霞．甜柿离体快繁技术研究［Ｊ］＿华中农业大学学报，１９９８ 原因。材料自身的生理状态不同，接种后褐变的程度也不 （２）：１７８－１８６． 【７】魏文雄．龙眼的花药培养与胚培养【Ｃ】／，陈正华．木本植物组织培养及 同。该试验中所选择的不同时间采摘的外植体，６月采摘的 其应用．北京：高等教育出版社，１９８６：４０８—４１２． （上接第１９９页） 少了施肥量，方便耕作，免去追肥环节，减轻了劳动量 ＿ｑ。施 壤，有机肥料中的主要物质是有机质，施用有机肥料增加了 肥时可按１：１或１：０．５的比例混施生物有机肥和复合肥，能 土壤中有机质的含量，有机质可以改善土壤物理、化学和生 提高肥料的利用率，省工、省力、省时，提质增效，比单纯施 物特性，熟化土壤，培肥地力ｌ引。另外，有机肥还能提升作物产 用生物有机肥的效果要好。 量和提高农产品品质，除含氮、磷、钾等元素外，还含有多种 ４参考文献 糖类、氨基酸等物质，不仅可为作物提供营养，而且可以促进 【１］陈永忠 由茶栽培技术【Ｍ］．长沙：湖南科学技术出版社，２００８． 土壤微生物活动，抗旱保湿，增强苗木预防病虫害的能力问。 ［２】胡玉玲，胡冬南，周城师，等．施肥对赣无系列油茶叶片ＳＰＡＤ值及养 ３．２增加复合肥施用的比例 分的影响ｆＪ１．林业科技开发，２０１１（２）：２０． ［３】董莉，于凤霞，罗宏伟．有机肥的作用【Ｊ１．吉林农业，２０ｏ４（８）：２５． 复合肥具有养分含量高、副成分少、物理性状好等优点， 『４吴春武．天然有机肥对油茶林的改土作用ｆ４１Ｊ１．安徽农学通报，２００９，１５ 主要成分是氮、磷、钾，这３种元素是植物生长最必需的营 （１３）：１３０—１３１． 养元素，对于平衡施肥、提高肥料利用率、促进作物的高度 【５】陈璐，郎南军，李甜江，等．施肥对油茶林分发展的影响研究进展『Ｊ］． 中国园艺文摘，２０１１，２７（１２）：１７７—１７９． 产稳产有十分重要的作用。随着农业生产的发展。高浓度长 ［６】王玉娟，龚春，幸伟年，等．不同施肥处理对油茶幼林林地土壤状况的 效化的复合肥越来越受到农民欢迎，这种类型肥料的应用减 影响［Ｊ］．中南林业科技大学学报：自然科学版，２０１ｌ，３１（１０）：６３—６８． ２０６
