落叶果树ＤＥＣＩＤＵＯＵＳ ＦＲＵＩＴＳ ２０１１（２） 巨峰葡萄组织培养快繁技术研究 冯发文，田群芳 （河南省滑县林业局，４５６４００） 摘要：采用巨峰葡萄腋芽茎段进行组织培养繁育技术试验。结果表明，无菌腋芽茎段诱导丛生芽较适 —ＢＡ，较适宜的根分化培养基组成为１／２ＭＳ＋ 宜的培养基组成为１／２ＭＳ＋０．０３—１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１．Ｏｍ 关键词ｉ巨峰葡萄；腋芽茎段；组织培养 中图分类号：￥６６３．１ 文献标识码：Ａ ０．１ｍｇ／ＬＩＡＡ，组培的环境条件是温度２２—２５％、每日光照１４小时和光照强度１８００～２０００Ｌｘ。 文章编号：１００２—２９１０（２０１１）０２—０ＯＯ６—０３ 葡萄（Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ Ｌｉｎｎ．）为葡萄科（Ｖｉｔａｃｅ． ａｅ）葡萄属（Ｖｉｔｉｓ Ｌｉｎｎ）多年生藤本植物，世界栽 培面积达１０００万ｈｍ ，占世界水果产量的３０％ 以上，仅次于柑桔居第二位。葡萄除了鲜食外， 可用于酿酒、制干和制汁等，还可作为食品工业 原料，又是美化庭园楼阁、绿化荒山碱滩的观赏 和绿化树种。 生产上葡萄苗木通常采用枝条扦插法繁 育，笔者利用组织培养法将腋芽茎段培育成为 试管苗和植株。现报告如下。 １材料与方法 水加０．０２％的洗洁精浸泡１０分钟，摇动，洗净 材料表面的菌物。将材料转入干净的三角瓶 中，加入７５％的酒精，浸泡杀菌２０秒钟，再用 蒸馏水漂洗一次，转入经过高压消毒的三角瓶 中，加入０．１％的升汞溶液，浸泡杀菌８分钟， 摇动三角瓶，使升汞与材料充分接触，取出用蒸 馏水冲洗４—６次，每次１～２分钟，除去残留的 升汞。 １．２接种方法与丛生芽的诱导 芽分化培养基的配制，以１／２ＭＳ为基本培 养基，即用ＭＳ的大量元素的一半，再附加０．０３ ～１．１试验材料与消毒 ０．１０ｍｇ／ＬＮＡＡ和０．５～１．０ｍｇ／Ｌ６一ＢＡ，配 将通过休眠期的巨峰葡萄枝条插入沙床中 催芽，待新梢长出３节以上时，剪取嫩枝，除去 幼叶，剪成１．０～１．５ｃｍ长的茎段，每段带有腋 制６种培养基（表１），用１．０ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ调 节ｐＨ值至５．８，加热到８０￣Ｃ时加人琼脂粉 ４．０ｇ／Ｌ，煮沸后分装于１００ｍｌ的三角瓶中制成 芽或顶芽，作为组培外植体。 取材时用７５％的酒精棉球擦洗剪刀，对盛 放嫩枝的器械消毒，减少细菌污染。用自来水 培养基，用膜封口，在高压锅中高压灭菌２５分 钟后备用。 茎段消毒后，放在消毒滤纸上吸干水分，于 茎段原下切面之上０．５ｃｍ左右处切一新切面， 使之成为０．５ｃｍ左右的小段，每段要有芽，分 冲洗茎段２—３小时后，放在无菌水中，置于冰 箱内，温度４￣Ｃ左右处理４小时，取出，用自来 收稿日期：２０１０—０８—１８ 作者简介：冯发文（１９７６一），男，工程师，主要从事林果业新技术推广应用和林果业育苗新技术研究工作。 ６ 别接种于６种芽分化培养基上。根据叶芽茎段 在不同培养基上诱导丛生芽情况，筛选出适宜 的诱导芽分化培养基和外植体，在温度２２— 生绿色不定芽，再经一周时间长成丛生芽，不同 培养基的诱导效果见表３。６种芽分化培养基 对葡萄腋芽茎段发生不定芽的诱导率７５％一 ２５￣Ｃ、每日光照１４小时、光照强度１８００— ２０００Ｌｘ条件下培养诱导不定芽。 表１ 巨峰葡萄腋芽茎段６种芽分化培养基的组成 １．３丛生芽根分化的诱导 设置生根培养基３种。丛生芽长１．０— １．５ｃｍ时切取丛生芽，接种在３种诱导根分化 的１／２ＭＳ培养基上（表２），每三角瓶培养基上 接种３～５个，用膜封口，培养条件同诱导丛生 芽条件。 表２ 巨峰葡萄腋芽茎段丛生芽３种根分化培养基组成 １．４试管苗的移栽 在三角瓶根分化培养基上已生根的葡萄小 植株，揭去瓶口封膜在培养室中炼苗７—１０天， 茎杆逐渐变红，叶片油亮并形成保护组织，部分 苗梢部伸出瓶口。将此组培小苗取出，洗净根 部附着的培养基，移栽到灭过菌的蛭石和珍珠 岩（１：１）的基质中，浇透水，用塑料薄膜盖 好，在膜上打些小孔，利于通气，置于温室中，一 周后逐渐揭去塑料膜，二周后植株开始长出新 叶，根开始伸长且长出新根。将组培苗连同基 质一起移人盆中或苗圃中。 ２结果与分析 ２．１丛生芽诱导效果 腋芽茎段在芽分化培养基上培养１５天，产 １００％，不定芽发生数量以Ｄ和Ｅ两种芽分化 培养基（１／２ＭＳ＋０．０３ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．Ｏｍｇ／Ｌ６ 一ＢＡ和１／２ＭＳ＋０．０５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．０ ｍｇ／Ｌ ６ 一ＢＡ培养基）诱导出的为多，分别是８个和６ 个。但不定芽的生长情况以Ｆ培养基（１／２ＭＳ ＋０．１０ ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１．Ｏｍｇ／Ｌ６一ＢＡ培养基）较 好。 表３不同培养基对巨峰葡萄腋芽茎段丛生芽诱导效果 培养基 蚕 ５．Ｏ ８０ ４．５ ７５ ５．０ ７８ ７．０ ｌｏ０ ６．５ ９０ １０．Ｏ ９５ ２．２根的诱导效果 切取的丛生芽接种在根分化培养基上，经 过ｌ０天的培养，在单芽茎段基部产生愈伤组 织，随后分化出了幼根，如表４。Ｓ１、Ｓ２和Ｓ３三 种培养基中，以ｓ２根分化培养基（１／２ＭＳ＋ ０．１ ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ培养基）诱导出根效果最好，诱 导率达到１００％，平均生根条数４．７条。Ｓ１（１／ ２ＭＳ＋０．１ ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ＋０．０５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ）和Ｓ３ （１／２ＭＳ＋０．０５ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ）培养基的诱导率分 别为６４％和７１％，平均生根条数分别为２．５条 和３．０条。 表４不同培养基对巨峰葡萄腋芽茎段丛生芽根的诱导效果 培养基 丛生芽接 生根数 平均生根 诱导率 代号 种数（个） （个） 条数（条） （％） Ｓｌ １００ ６４ ２．５ ６４ Ｓ２ １００ １００ ４．７ １００ Ｓ３ １Ｏ０ ７ｌ ３ Ｏ ７１ ２．３无菌植株的建立 茎段带菌是建立无菌系的障碍。当叶芽茎 段经过７５％酒精杀菌２０秒、０．１％的升汞溶液 杀菌８分钟后，未能彻底解决茎段带菌问题，接 种于培养基第４天，在茎段周围可见菌落，而远 ７ 离茎段的培养基上未见霉菌菌落，污染多发生 在茎段处。接种于培养基第６天，在超净工作 台上，将未染菌的茎段转移，最终建立了无菌植 株。 腋芽茎段组培诱导丛生芽和根的环境条件是温 度２２—２５℃、每日光照１４小时、光照强度１８００ ～２０００Ｌｘ。培养建立无菌植株，需对腋芽茎段 进行严格杀菌消毒。发现带菌茎段，及时将未 栽于基质中前，需经光锻炼健壮后进行。 ２．４试管苗的移栽 葡萄试管苗叶片薄，组织结构疏松，气孔突 起，开口大，根系活力低，是移栽于基质中困难 的主要原因。光培炼苗改善苗质是移栽成活的 污染的茎段转移。组培苗由三角瓶培养基上移 试验中发现０．１％的升汞浸泡８分钟，时 间稍长些，对茎段有一定程度的毒害作用，影响 关键，掌握好移栽过程中的细节，移栽成活率能 达到９０％以上。 ３结论与讨论 了茎段腋芽萌发，可以进行减少升汞消毒的时 间试验，减轻对茎段的毒害影响。对不定芽继 代培养中的繁殖系数，繁殖周期以及诱导生根 步研究。 研究结果表明，巨峰葡萄无菌腋芽茎段诱 导丛生芽较适宜的培养基组成为１／２ＭＳ＋０．０３ ～一的周期，移栽到大田后根系的发育情况等需进 １．０ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ６一ＢＡ，腋芽茎段不 通过葡萄叶芽茎段诱导丛生芽的途径获得 供了可能途径。 定芽发生快，数量多。较适宜的根分化培养基 组成为１／２ＭＳ＋０．１ｍｇ／ＬＩＡＡ，根系发达，健壮。 了再生完整小植株，为葡萄苗木的快速繁育提 套袋苹果贴字方法 苹果贴字是一项果品增值新技术，能提高苹果的 经济效益，近年来已被果农广泛使用。笔者根据工作 经验总结出苹果贴字方法。 贴字苹果的选择选择果形端庄、大小适中、耐贮 字模平展在果面上摆正，双手大拇指从中间向四周将 字模压实，尽量减少“即时贴”皱折而影响贴字效果。 “即时贴”易脱落。操作时手要干净，防止字模胶面粘 上灰尘影响粘阽的牢固性。 字模的选择耐运和经济价值高的着色系苹果套袋果，如红富士和 新红星等。 字贴的选择选用一面带胶，一面不带胶的两层 ７５规格苹果选择４０ｍｍ×６０ｍｍ字 模，８０、８５规格苹果宜选用４６ｍｍ×６０ｒａｍ字模。字体 要求：尽量选择笔画粗实、图案清晰的字或图，慎用行 纸合成的进口或国产的“即时贴”纸。 贴字时间一般套袋果边摘除内袋边贴字效果较 书、草体等笔画细、连笔多的字体或图案。 贴字后的管理。贴字后，摘除果实周围５—１０ｃｍ 好，红富士苹果贴字，不干胶纸字模在宝鸡于９月２Ｏ 范围枝梢基部的遮光叶，增加果面受光；当向阳面着色 日进行粘贴，塑料薄膜字模于９月２５日进行粘贴为 宜，不干胶纸字模贴在果实的阳面，塑料薄膜字模贴在 果实阳面的两侧，切不可贴于阳面，否则果实会产生１３ 灼。并注意在早、晚气温较低时将字模贴在果实阳面 两侧。 鲜艳时转果，转果时捏住果柄基部，右手握着果实，将 阴面转到阳面，使其着色。 适期采收包装 当贴字果整果着色均匀且鲜艳 后，即可采摘。在宝鸡一般１０月ｌ０—１５日采摘。贴 字果采收后，揭去果面的贴字，擦净果面，根据不同的 贴字的方法取下果袋，将果面贴字处的果粉用 字迹，分别按字组配对、贴标签、套网套和装箱，做好标 记。 柔软纸或布轻轻擦掉，字贴最好贴于向阳果面的臀部。 揭下“即时贴”字模，一手抓果，一手贴字，将“即时贴” 孙兆军（陕西省宝鸡市蚕桑园艺工作站，７２１０００） ８
