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MicroRNA-21在胃癌患者血清中的表达及临床意义

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实用医学杂志2013年第29卷第5期 729 MicroRNA一21在胃癌患者血清中的表达及临床意义 张广钰钟漓 田小林戴凌 朱袭嘉 蒋志庆 摘要 目的:探讨microRNA一21在胃癌患者与正常人血清中的表达情况。并分析其表达与临床病理特 征的相关性。方法:提取6O例胃癌患者和60例正常人血清的总RNA.采用RT—qPCR方法检测microRNA一 21的相对表达量。结果:胃癌患者与正常人血清比较,microRNA.21在胃癌患者血清中表达上调 其表达与 胃癌患者的淋巴结转移和TNM分期有显著相关性(P<0.05)。结论:胃癌患者血清中microRNA一21的表达 上调与病情进展具有一定的相关性,可能作为新的治疗靶点的分子标志物。 关键词 胃肿瘤:microRNA一21:血清:淋巴结转移:TNM分期 Expression of serum microRNA-21 in gastric cancer and its clinical significance ZHA NG Guang—yu, ZHONG Li,TIAN Xiao—lin,DA,Ling,ZHU Xi ̄ia,JIANG Zhi—qing.Department of Gastrointestinal Surgery, Afilfiated Hospitl,Guialin Medical College,Guilin 541001,China Corresponding author:DA I Lin E—maif:acrosssky@126.com 【Abstract】 Objective To investigate the expression of serum microRNA一21 in patients with gastric cancer and in healthy people and to analyze the association of the expression with the clinicopath0logical features.Methods The expression levels of serum microRNA一2 1 in 60 patients with gastric cancer and 60 healthy people were detected by using stem—loop real—time reverse transcription—polymerase chain reaction(RT—qPCR).Results Expression levels of microRNA一21 were upregulated in patients with gastric cancer,as compared with the healthy people(P<0.05). The expression of microRNA一21 was closely associated with lymphatic metastasis and TNM stages fP<0.05 for both comparisons). Conclusions The upregulation of serum microRNA一2 1 expression has some relation with disease progression;and microRNA一21 can be used as a new molecular marker for targeted therapy. 【Key words】 Stomach neoplasms; MicroRNA一2 1; Blood serum;Lymphatic metastasis;TNM stages 胃癌是我国高发的恶性肿瘤,在肿瘤中的致死 率排名第二l_。其发生发展是多阶段、多因素、多基 因参与的过程,早期诊断难,预后较差。microRNA 参与增殖、分化、凋亡、耐药等多种细胞活动的调 控 ]。我们采用RT—qPCR的方法检测60例胃癌患 者和60例正常人血清中的microRNA.21的表达情 况,分析并探讨其与胃癌患者临床病例特征的关系。 1资料与方法 1.1一般资料收集201 1年6月至2012年6月 0D260/280在1.8~2.0之间。 1.3 cDNA制备20 L体系逆转,步骤:1 txL血 清RNA(终浓度0.0l一0.42 ),1 L microRNA一21 (表1)逆转引物(终浓度0.05 ̄mol/L),9 txL的 RNase.free ddH2O,混匀,65℃5 min,冰上5 min。加 5 xbuffer 4 L,RNA酶抑带0齐0 1 L,10 mmol/L dNTP 2 ,逆转录酶1 。反应条件:42%60 min, 70℃5 min,一80℃保存备用。 表1 MicroRNA一21逆转和qPCR引物的序列 Reverse transcription 5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATrCAGTrGAGACAGCCCA・3 F01 ̄vard Revesre 5 .ACACTcCAGCTGGGCAACACCAGTCGATG.3 5 .GTGCAGGGTCCGAGGT一3 在桂林医学院附属医院行手术治疗的胃癌患者血清 6O例,术前未行放、化疗等治疗。同时采集60名正 常人血清。miRcute miRNA试剂盒购自Tiangen:逆 转录酶、RNA酶抑制剂、5 xbuffer、dNTPs、SYBR Mastermix等购自Takara:引物由Invitrogen合成 1.2 RNA提取按说明书提取RNA。采用日本 Malcom微量光谱光度计e—spect测定RNA浓度, 1.4取cDNA进行qPCR 25 L反应体系:1 逆转的cDNA、12.5 U1 2 SYBR Green I Master mix、 1 IxL microRNA21/U6前向和反向引物混合液(终 浓度0.5 p ̄mol/L)、ddH O 10.5 L;反应条件:98℃ 7 min,98 15 S,60。30 s,40个循环。PCR仪Agilent doi:10.3969/j,issn.1006—5725.2013.05.018 作者单位:541001桂林医学院附属医院胃肠外科 通信作者:戴凌E.mail:acrosssky@126.COB Technologies stratagene Mx3005p。MicroRNA一2 1的 相对表达情况以公式log,O2 来表示[ 。 730 实用医学杂志2013年第29卷第5期 1.5统计学方法采用SPSS13.0统计软件行非 参数秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 不同性别和年龄段的表达情况见表2。 胃癌患者及正常人血清中的microRNA.21的 表达情况:胃癌患者和正常人血清中的microRNA.2 1 胃癌患者及正常人血清中的microRNA.21在 的相对表达Ct值,差异有统计学意义(P<0.01)。胃 表2 MicroRNA一21在正常人和胃癌患者的分布 癌患者血清中的mieroRNA一21的相对表达值明显 低于正常人,表明microRNA.21在胃癌患者血清 中表达上调(图1)。 表3 MicroRNA一21与胃癌患者临床病理特征的关系 因素 例数MicroRNA 21 SHxl,-表达量(95%C1)t 值 胃癌患者相对ct值 正常人相对Ct值 组别 图1 MicroRNA一21在胃癌患者和正常人血清中的相对表 达情况 胃癌患者血清中microRNA.21表达与临床病 理参数的关系分析:胃癌患者血清中microRNA.21 的表达与临床TNM分期有显著相关性(P<0.05); 胃癌患者血清组织中microRNA一21的表达与淋巴 结的转移情况的相关性有统计学意义(P<0.05). 淋巴结转移组患者血清中microRNA.21的相对表 血液中检测到多种microRNA的表达上调Z6-7 本研究显示,microRNA.21在胃癌患者血清中的 表达量明显高于正常人。差异有显著性(P<0.05)。 microRNA.21表达与患者的TNM分期和淋巴结转 移情况相关。Ⅳ期患者的microRNA一21相对表达 达量高于无淋巴结转移组(表3)。 3讨论 胃癌是我国临床上常见的恶性肿瘤之一.随着 分子靶向治疗和化疗的进展,胃癌患者中位生存期 有所提高,但效果不佳,易复发,因此急需新的治疗 靶点。随着癌症分子水平研究的深入,发现microRNA 在癌症发生、发展与转移中起到一定作用。 MicroRNA 19~25个碱基,与3 端非编码区的 mRNA(3 UTR)结合从而抑制转录影响基因的表 达,促进或抑制肿瘤[ 。microRNA在血清中以内囊 小体的形式存在,使其处于无RNase的环境中.维 持了它的完整性。有学者在胃癌和结肠癌患者的 量高于Ⅲ期患者,Ⅲ期高于I和Ⅱ期。有淋巴结转 移胃癌患者血清中microRNA.21相对表达量高于 无淋巴结转移组。 研究报道[s-10i microRNA.21作用于PTEN和 PDCD4的mRNA,下调这两个重要的抑癌基因. 从而促进了肿瘤的转移。microRNA.21在胃癌 患者血清中表达升高.而且与临床TNM分期和 淋巴结转移有显著相关性,其具体机制尚未明确 该研究结果提示胃癌患者血清中microRNA一2j 与病情进展有关系,对胃癌治疗具有一定指导 意义 实用医学杂志2013年第29卷第5期 731 4参考文献 [1] Siegel R,Desantis C,Virgo K。et a1.Cancer treatment and epidermal growth faetor/ras signaling and its transcription factors[J].DNA Cell Biol,2012,3I(8):1403—1411. [7] Yamanaka S,Olaru A V,An F,et a1.MicroRNA一21 inhibits Serpini 1, a gene with novel tumour suppressive effects in survivorship statistics[J1.CA CancerJ Clin,2012,62(4):220--241. [2]Yang W,Lee D Y,Ben—David Y.The roles of microRNAs in tumorigenesis and angiogenesis[J].Int J Physiol Pathophysiol Pharmacol,2011.3(2):140—155. gastric cancer【J].Dig Liver Dis,2012,44(7):589—596. ankel L B, Christoffersen N R, Jacobsen A, et a1. [8] Fr[3]潘有光,赵健.microRNA与肿瘤耐药机制的研究进展[J]. 实用医学杂志.2012,28(4):673—675. Programmed cell death 4(PDCD4)is an important functional target of the microRNA miR一21 in breast cancer cells[J].J Biol Chem,2008,283(2):1026—1033.  a1.MicroRNA一21 [9] Meng F,Henson R,Wehbe-Janek H,etregulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in [4]Yuxia M,Zhennan T,Wei Z.Circulating miR一125b is a novel biomarker for screening non・-small・・cell lung cancer and predicts poor prognosis[J].J Cancer Res Clin Oncol,2012,138(12): 2045—2050. human hepatocellular cancer[J].Gastroenterology,2007,133 (2):647—658. Dey N.[1O] Das F,Ghosh—Choudhury N,et a1.microRNA一21 [5] Ford L P,Cheng A.Using synthetic precursor and inhibitor miRNAs to understand miRNA funetion『J].Methods Mol Biol, 2008,419:289—301. governs TORC 1 activation in renal cancer cell proliferation and [6]Kern H B,Niemeyer B F,Parrish J K,et a1.Control of microrna.2 1 expression in colorectal cancer cells by oncogenic invasion[J].PLoS One,2012,7(6):e37366. (收稿:2012—09—20编辑:张倩) 颅咽管瘤患者中ADAMDEC 1的表达及临床意义 刘亮 郑晓梅杨福兵 王斌 包长顺 陈礼刚 徐建国 游潮 摘要 目的:探讨ADAMDEC1在颅咽管瘤中的表达及意义 方法:前瞻性观察36例颅咽管瘤患者 ADAMDEC1的表达情况.其中21例釉质上皮型,设为釉质组;l5例鳞状乳头型,设为鳞型组;5例对照组脑 组织标本取自重型颅脑外伤行内减压术的正常脑组织。采用免疫组化、RT.PCR方法检测颅咽管瘤组织中 ADAMDEC1的表达。结果:与对照组相比.釉质组及鳞型组颅咽管瘤组织中,ADAMDEC1表达明显增高,而 对照组脑组织中均无表达,差异有统计学意义(P<0.05);与鳞型组相比,釉质组ADAMDEC1表达明显增 高,差异有统计学意义(P<O.05)。结论:ADAMDEC1在颅咽管瘤组织中高度表达,并可作为检测颅咽管瘤 潜在增殖的标志物 关键词 颅咽管瘤: 釉质上皮型; 鳞状乳头型: ADAMDEC1 Expression and significance of ADAMDEC1 in patients with craniopharyngioma LIU Liang ,ZHENG Xiao— mei,YANG Fu—bing,WANG Bin,BA0 Chang-shun,CHENLi—gang,XUJian—guo,YOU Chao. Department of Neurosurgery,the Afilfiated Hospital fLuzhou oMedical College,Luzhou 646000,China Corresponding author:ZHENG Xiao—mei E—mail:zxmlst@163.com 【Abstract】 Objective To explore the expression and signiifcance of ADAMDEC 1 in craniopharyngioma. Methods 36 cases of craniopharyngioma were included,of which 2 1 cases were of enamel epithelial type(group A), the other 1 5 were of squamous papillary type f group B1.Another 5 brain tissue samples from internal decompression patients of heavy traumatic brain injury were included as control group.The expressions of ADAMDEC1 in these tissues were detected by immunohistochemistry and RT—PCR.Results ADAMDEC 1 was not expressed in control group, while the protein and mRNA levels of ADAMDEC 1 in group A and B were signiifcantly increased(P<0.05), especially in group A(compared to group B,P<0.05). Conclusion ADAMDEC 1 was highly expressed in eraniopharyngioma tissue,and might be a potential sign for indicating craniopharyngioma proliferation. 【Key words】 crani0pharyngioma; Enamel epithelial type; Squamous papillary type; ADAMDEC 1 doi:10.3969/j.issn.1006—5725.2013.05.019 基金项目:四川省卫生厅基金项目(编号:l10371);泸州市科技局基金项目(编号:2011一I-¥36—1/7) 作者单位:646000泸州医学院附属医院神经外科(刘亮,杨福兵,王斌,包长顺,陈礼刚);646000四川省泸州市人民医院神经内科 (郑晓梅);610041成都市,四川大学华西医院神经外科(徐建国,游潮) 通信作者:郑晓梅E.mail:zxmlst@163.con 

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